Пользовательского поиска

использовали  в  качестве  доноров  ядер  на  7-9  пассажах  культивирования, фибробластоподобные  клетки  плода  на  4-6  пассажах  и  клетки  молочной  железы  на  3-6  пассажах. Деление  клеток  всех  трёх  типов  оставливали  на  стадии  GO  и  ядра  клеток  пересаживали  в  энуклеированные  ооциты  (яйцеклетки)  на  стадии  метафазы  II. Большинство  реконструированных  эмбрионов  сначала  культивировали  в  перевязанном  яйцеводе  овцы, но  некоторые  эмбрионы  культивировали   in  vitro  в  химически  определённой  среде. Коэффициент  выхода  морул  и  бластул  при  культивировании  in  vitro  в  одной  серии  опытов  был  даже  вдвое  выше, чем  при  культивировании  в  яйцеводе  (поэтому  видимо  нет  строгой  необходимости  в  промежуточном  реципиенте   и  можно  обойтись  культивированием  in  vitro).

Выход морул  и  бластул  в  серии  опытов  с  культурой  клеток  молочной  железы, был  примерно  втрое  меньше, чем  в  двух  других  сериях, когда  в  качестве  доноров  ядер  использовали  фибропластов  плода  или  эмбриональных  клеток. Число  живых  ягнят  в  сравнении  с  числом  пересаженных  в  матку  окончательного  реципиента    морул  или  бластул  было  также  в  два  раза  ниже. В  серии  опытов  с  клетками  молочной  железы  и  277  реконструированных  яйцеклеток   был  получен  только  один  живой  ягнёнок, что  говорит  об  очень  низкой  результативности  такого  рода  экспериментов   (0,36%). Анализ  генетических  маркеров  всех  семи  родившихся  в  трёх  сериях  экспериментов  живых  ягнят  показал, что  клетки  молочной  железы  были  донорами  ядер  для  одного, фибропласты    плода – для  двух  и  эмбриональные  клетки  четырёх  ягнят.. Овца  Долли  развилась  из  реконструированной  яйцеклетки, донором  ядра  которой  была  культивируемая  клетка  молочной  железы  овцы  породы  Финн  Дорсет. Долли  фенотипически  не  отличается  от  овец  этой  породы, но  сильно  отличается  от  овцы-реципиента  породы  шотландская  черномордая. Анализ  генетических  маркеров  подтвердил  этот  результат.

Успех  авторов  этой  работы,  прежде  всего,  связан  с  использованием  длительных  клеточных  культур, так  как  после  многих  пассажей  в  культуре  клеток  могли  быть  отобраны  малодифференцированные  стволовые  клетки, которые  вероятно  и  были  использованы  как  доноры  ядер. Большое  значение  имел 

Яндекс цитирования Rambler's Top100

Главная

Тригенерация

Новости энергетики